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細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)~傳代

更新時間:2022-03-07  |  點(diǎn)擊率:1423

傳代

 

1、貼壁細(xì)胞傳代時,先用消化液潤洗一遍;棄掉后,再加入適量消化液置于孵箱或鏡下觀察消化;當(dāng)細(xì)胞變圓,彼此之間產(chǎn)生空隙,加入等量或大量的培養(yǎng)基終止消化,培養(yǎng)基中的血清可以抑制胰蛋白酶的活性。

2、這里我沒有明確提到胰蛋白酶的濃度,并不是說濃度越高越好。胰蛋白酶底物的特異性差,會破壞細(xì)胞膜成分。PH8.0,37度環(huán)境下,消化液的消化能力是很強(qiáng)的。培養(yǎng)基中的血清會降低胰酶的消化能力,所以每次消化前,也要用PBS反復(fù)沖洗干凈培養(yǎng)皿。日常用的比較多的消化液濃度:a)0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA

b)0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA

c)0.25%胰蛋白酶

3、傳代后如果細(xì)胞不貼壁,可能的原因是胰蛋白酶消化過度或者沒有清洗干凈EDTA。

4、懸浮細(xì)胞傳代時,正常收集細(xì)胞、離心濃縮、用培養(yǎng)基重懸就可以了。懸浮細(xì)胞每次換液都需要離心重懸,但是由于懸浮細(xì)胞一般會處于單細(xì)胞層生長,有的時候生長速度很快,重懸后如果不晃動培養(yǎng)皿,就會看到細(xì)胞成團(tuán);如果經(jīng)常顯示懸浮細(xì)胞大量抱團(tuán)生長,也有可能是培養(yǎng)基中的血清問題、或者鈣鎂離子濃度的變化造成了細(xì)胞間的粘附力改變。

科研實(shí)驗(yàn)中,細(xì)胞的體外培養(yǎng)一直是一個重要環(huán)節(jié)。細(xì)胞要養(yǎng)好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細(xì)胞培養(yǎng),尤其適合難養(yǎng)細(xì)胞,如:干細(xì)胞、肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞,原代培養(yǎng)、細(xì)胞融合、轉(zhuǎn)染細(xì)胞等。

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